Изучение иммунного статуса детей с ретинобластомой на фоне органосохранного и ликвидационного лечения

Ретинобластома – злокачественная опухоль оптической части сетчатки нейроэктодермального происхож- дения, встречающаяся у детей раннего возраста.
Цель исследования. Изучить изменения субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у детей с тяжелой формой ретинобластомы после проведенного ликвидационного и органосохранного лечения.
Материал и методы. С 20 декабря 2023 г. до 1 сентября 2025 г. в отделении офтальмоонкологии и радиоло- гии НМИЦ ГБ им. Гельмгольца обследованы 45 ребенка (90 глаз) с первично выявленной ретинобластомой, в возрасте от 1,5 до 84 месяцев (средний возраст 28,9 месяца). В исследование вошли дети с запущенной формой ретинобластомы (возраст от 2–5 лет): группа Д – 5 человек, группа Е – 12 человек. Материал иммунологического исследования – цельная кровь пациентов. Оценка субпопуляционного состава лим- фоцитов проведена на проточном цитометре BD FACS Canto II (BectonDickinson, CША) с использованием моноклональных антител Multitest 6-Color TBNK Reagent в пробирках BD Tru Сount (BectonDickinson, CША).
Результаты. До лечения в крови детей групп Д и Е наблюдалось увеличение общего числа лимфоцитов, достоверное повышение общего числа Т-клеток по сравнению с контролем (p<0,05). В обеих группах обнару- жены существенные сдвиги в абсолютном и относительном содержании натуральных киллеров относительно нормы: показатели достоверно превышали и отличались от таковых у здоровых детей (p<0,05). В других показателях иммунного статуса детей с запущенной формой ретинобластомы групп Д и Е были выявлены различия, которые оказались статистически незначимыми. При оценке абсолютного и относительного числа NK-клеток (CD16+CD56+) в крови пациентов группы E после лечения данные показатели нормализовались относительно группы контроля, что, вероятно, связано с удалением опухолевой массы и снижением воз- действия на иммунную систему. В крови пациентов с органосохранным лечением (группа Д) определялась похожая динамика изучаемых показателей: достоверное уменьшение абсолютного числа NK-клеток после химиотерапии (ХТ). В обеих группах после лечения отмечены некоторые изменения качественного и ко- личественного состава клеток адаптивного иммунитета: незначительное снижение числа В-лимфоцитов, общего числа Т-клеток и Т-цитотоксических лимфоцитов. В группе Д наблюдалось статистически значимое уменьшение относительного содержания Т-хелперов, и, как следствие, понижение соотношения CD4+/CD8+.
Заключение. Оба вида проводимого лечения обладают выраженным эффектом в отношении NK-клеток, значимо понижая их абсолютное и относительное число в периферической крови. Оценка динамики основ- ных параметров иммунного статуса не выявила выраженного неблагоприятного действия ХТ на клеточный состав адаптивного звена иммунитета. Требуются дальнейшее изучение особенностей субпопуляционного состава лимфоцитов на больших по численности клинических выборках. Ключевые слова: ретинобластома, иммунный статус, лимфоциты, субпопуляции, проточная цитометрия, органосохранное лечение, ликвидационное лечение
Конфликт интересов. Авторы заявляют, что исследование проводилось при отсутствии каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могли бы быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.
Финансирование. Работа выполнена без спонсорской поддержки.

Retinoblastoma is a malignant tumour of the optic part of the retina of neuroectodermal origin, occurring in young children.
Objective. To study changes in the subpopulation composition of peripheral blood lymphocytes in children with advanced retinoblastoma after enucleation and organ-preserving treatment.
Material and methods. From 20 December 2023 to 1 September 2025, 45 children (90 eyes) with newly diagnosed retinoblastoma, aged between 1.5 and 84 months (mean age 28.9 months), were examined at the Department of Ophthalmic Oncology and Radiology of the Helmholtz National Medical Research Center (mean age 28.9 months). The study included children with advanced retinoblastoma (aged 2–5 years) in group D – 5 patients, and group E – 12 patients. The material for immunological examination was whole blood from patients. The subpopulation composition of lymphocytes was assessed using a BD FACS Canto II flow cytometer (BectonDickinson, USA) with Multitest 6-Color TBNK Reagent monoclonal antibodies in BD Tru Count tubes (BectonDickinson, USA).
Results. Prior to treatment, an increase in the total number of lymphocytes and a significant increase in the total number of T cells were observed in the blood of children in groups D and E compared to the control group (p<0.05). In both groups, significant shifts in the absolute and relative content of natural killer cells relative to the norm were found: the indicators significantly exceeded and differed from those of healthy children (p<0.05). In other indicators of the immune status of children with advanced retinoblastoma of groups D and E, statistically insignificant differences were revealed. When assessing the absolute and relative number of NK cells (CD16+CD56+) in the blood of patients in group E after treatment, these indicators normalized relative to the control group, which is probably due to the removal of the tumor mass and a decrease in the impact on the immune system. In the blood of patients undergoing organ-preserving treatment (group D), a similar trend in the studied indicators was observed: a significant decrease in the absolute number of NK cells after chemotherapy. In both groups, some changes in the qualitative and quantitative composition of adaptive immune cells were noted after treatment: a slight decrease in B-lymphocytes, the total number of T-cells, and T-cytotoxic lymphocytes. In group D, there was a statistically significant decrease in the relative content of T-helpers and, as a result, a decrease in the CD4+/CD8+ ratio. Conclusion. Both types of treatment have a pronounced effect on NK cells, significantly reducing their absolute and relative count in peripheral blood. Assessment of the dynamics of the main parameters of immune status did not reveal a pronounced adverse effect of chemotherapy on the cellular composition of the adaptive immune system. Further study of the characteristics of the subpopulation composition of lymphocytes in large clinical samples is required. Keywords: retinoblastoma, immune status, lymphocytes, subpopulations, flow cytometry, organ-preserving treatment, radical treatment
Conflict of interest. The authors declare that the research was conducted without any commercial or financial relationships that could be construed as a potential conflict of interest.
Funding. The work was performed without sponsorship.

Ретинобластома – злокачественная опухоль оптической части сетчатки нейроэктодермального происхождения встречающаяся у детей раннего возраста [1–5]. Характеризуется высокой степе- нью злокачественности инфильтративным ростом в ткани глаза и орбиты метастазированием в центральную нервную систему, легкие костную ткань при отсутствии лечения – 100% леталь- ность [6–9]. Современная классификация (ICRB Амстердам, 2001) основанная на клинической картине размерах и локали- зации очага включает 5 групп: A B C D E из которых благопри- ятный прогноз имеют начальные и средние стадии заболевания (A B C) [10–13]. Остается высокий процент детей поздно обра- тившихся к врачу. Как правило это пациенты более старшего возраста у которых чаще всего диагностируются запущенные формы ретинобластомы (D и Е группы) и требуют более агрес- сивного и даже ликвидационного лечение (энуклеации) [14–16]. Показаниями для энуклеации при ретинобластоме является чаще всего сочетание 2–3 признаков: 1) крупный узел поражающий 2/3 и более полости глаза 2) распространение на цилиарное тело 3) кровоизлияние на поверхности опухоли 4) отслойка сетчатки 5) диссеминированные опухолевые отсевы в стекловидном теле 6) гемофтальм 7) рубеоз 8) вторичная глаукома 9) буфтальм 10) псевдогипопион 11) отек роговицы 12) отсутствие зрения 13) риск развития экстрабульбарного роста 14) гипотония [17 18]. Своевременно выполненная энуклеация в комплексе с поли- химиотерапией (ПХТ) повышает выживаемость больных до 98% [19–21]. В настоящее время благодаря совершенствованию лучевой терапии внедрению новых способов введения химиоте- рапевтических средств (системных и локальных) расширились показания к органосохранному лечению [14 22 23]. Как известно эффективность лечения злокачественных ново- образований их прогноз в значительной степени зависит от состояния иммунной системы пациента [24]. Прогрессирование онкопатологии сопровождается серьезными нарушениями в составе иммунокомпетентных клеток реализующих проти- воопухолевую защиту организма [25 26]. Раннее было показано что тяжелые стадии нелеченой ретино- бластомы (группы D и Е) связаны с изменениями в Т-клеточном звене иммунитета. В трети случаев отмечено снижение содер- жания натуральных киллеров (NK-лимфоцитов) играющих ключевую роль в распознавании и элиминации малигнизиро- ванных клеток [27]. Выявление изменений в клетке осуществля- ется с помощью набора активирующих рецепторов NK-клеток. Важную группу в этом наборе составляют рецепторы натураль- ной цитотоксичности NCR: NKp46/ NCR1 NKp44/NCR2 и NKp30/ NCR3 принадлежащие к суперсемейству иммуноглобулинов. Они играют основную роль в активации NK-клеток при вирусных инфекциях и опухолевых заболеваниях [28]. Применение цитостатических средств сопряжено с целым рядом побочных эффектов в частности может привести к лим- фопении иммуносупрессии и как следствие к ослаблению иммунного ответа повышенному риску присоединения инфек- ций рецидиву опухолевого роста и других осложнений. В связи с этим поддержание адекватного иммунного статуса пациентов при лечении запущенных форм ретинобластомы представляет важную клиническую проблему которая до насто- ящего времени остается нерешенной. Цель исследования: изучить изменения субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у детей с тяжелой формой ретинобластомы после проведенного ликвидационного и органосохранного лечения. Материал и методы С 20 декабря 2023 г. до 1 сентября 2025 г. в отделении офтальмоонкологии и радиологии НМИЦ ГБ им. Гельмгольца обследованы 45 ребенка (90 глаз) с первично выявленной рети- нобластомой в возрасте от 1,5 до 84 месяцев (средний возраст 28,9 месяца). В данное исследование вошли дети с запущенной формой ретинобластомы (возраст 2–5 лет): группа Д – 5 человек группа Е – 12 человек. Группу контроля составили соматически здоровые 14 доноров сопоставимых по возрасту без воспалительных и онкологических заболеваний глаз. Всем детям проводили общее клиническое обследование (сбор анамнеза анализ медицинской документации) стандартное офтальмологическое обследование, которое включало в себя визометрию (проводили с помощью ориентировочных тестов слежения за беззвучными предметами на разном расстоянии у детей более старшего возраста от 2,5–3,0 лет остроту зрения определяли по таблицам Сивцева Орловой, кольцам Ландольта) тонометрию по Маклакову биомикроскопию с помощью ручной щелевой лампы. Всем пациентам было выполнено специализированное офтальмологическое обследование которое включало офталь- москопию во время медикаментозного сна с максимальным мидриазом на ретинальной фундус-камере ультразвуковое исследование глаза спектральную оптическую когерентную томографию. Данные исследования проводили для определения группы заболевания и для выбора методов лечения. В группе D проводили системную ПХТ по схеме «VEC» (вин- кристин этопозид карбоплатин) локальную интравитреальную химиотерапию (ХТ) – ИВХТ (мелфалан и топотекан) и селектив- ную интраартериальную ХТ – СИАХТ (мелфалан) или сочетанную ХТ ПХТ+ИВХТ+СИАХТ. В группе Е всем детям была проведена энуклеация а в даль- нейшем после получения гистологического заключения всем пациентам провели системную химиотерпию: (ПХТ по схеме «VEC» – винкристин этопозид карбоплатин) и 2 детям помимо системной ХТ провели 2 курса дистанционной лучевой терапии. Детям групп Д и Е а также группе контроля проводили оценку клеточного иммунного статуса. Материалом иммунологических исследований явились образцы цельной крови забранной из локтевой вены натощак в утренние часы (9.00–10.00 часов) после окончания лечения (не ранее 30 дней после последнего курса ХТ). Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови определяли методом лазерной проточной цитофлуо- риметрии с использованием системы моноклональных анти- тел Multitest 6-Color TBNK Reagent в пробирках BD Tru Сount (BectonDickinson CША) на проточном цитометре BD FACS Canto II (BectonDickinson CША) с помощью программы Canto (Becton Dickinson США). Статистическая обработка данных и вариационный анализ выполнены в программах «Biostatd» «Excel» (М – среднее значение m – ошибка отклонения t – критерий Стьюдента, U-критерий Манна–Уитни) уровень статистической значимости: p<0,05. Результаты Поддержание адекватного иммунного статуса детей при лече- нии запущенных форм ретинобластомы представляет важную клиническую проблему которая остается нерешенной. В научной литературе нет данных об оценке иммунного статуса при этой патологии. В настоящей статье представлены результаты срав- нительного анализа качественного и количественного состава иммунокомпентентных клеток крови детей с ретинобластомой групп Д и Е до и после лечения. Данные иммунофенотипирования основных субпопуляций лимфоцитов крови больных детей с ретинобластомой по срав- нению с контролем представлены в таблице. В ходе анализа результатов исследования установлено что показатели субпопуляционного состава лимфоцитов сформи- рованной группы контроля находились в пределах диапазона нормы (для соответствующего возрастного периода 2–5 лет), установленных А.Ю. Щербиной [28]. До лечения в крови детей группы Д наблюдалось увели- чение общего числа лимфоцитов достоверное повыше- ние общего числа Т-клеток (до 2,92±0,5×109/л) Т-хелперов (до 1,58±0,2×109/л) по сравнению с контролем (p<0,05, табл.). Похожие изменения указанных показателей по отношению к норме до лечения наблюдались и в группе Е. В целом же при сравнении параметров иммунного статуса детей групп Д и Е с запущенной формой ретинобластомы выявлены некоторые отличия показателей связанные с небольшим снижением содержания CD45+ клеток и Т-лимфоцитарного звена однако наблюдаемые различия были статистически незначимыми. В обеих группах обнаружены существенные сдвиги до лечения в абсолютном и относительном содержании натуральных кил- леров относительно нормы: показатели были достоверно повы- шенными и отличались от таковых здоровых детей (p<0,05). Следует отметить что в ранее проведенном исследовании у пациентов с первично выявленной нелеченой ретинобластомой во всех группах (А В С Д Е) выявлена аналогичная законо- мерность изменений числа NK-лимфоцитов [29]. Как известно, натуральные киллеры являются клетками врожденного иммун- ного ответа обладают цитотоксичностью играют важную роль в надзоре за опухолями. Функциональная активность NK-клеток также проявляется выработкой цитокинов и костимуляцией при непосредственном контакте с опухолью [30 31]. При оценке абсолютного и относительного числа NK-клеток (CD16+CD56+) в крови пациентов с ликвидационным лечением (группы E) до лечения было выявлено достоверное увеличение параметров по сравнению с таковыми в группе контроля: абсо- лютные – 0,53±0,09 x109/л 0,25±0,04 x109/л (р≤0,035) и отно- сительные –14,56±1,58 и 8,19±1,04% (р≤0,011). В этой же группе после лечения наблюдалось статистически значимое снижение содержания NK-клеток: 0,53±0,09 x109/л и 0,25±0,03 x109/л (р≤0,028) 14,56±1,58% и 7,77±0,95% (р≤0,001). Этот показатель практически вошел в диапазон группы контроля (0,25±0,03 x109/л и 0,25±0,04 x109/л; 7,77±0,95% и 8,19±1,04%), что вероятно связано с удалением опухолевой массы и сниже- нием воздействия на иммунную систему. В крови пациентов с органосохранным лечением (группа Д) после лечения определялась похожая динамика изучае- мых показателей: достоверное уменьшение абсолютного числа NK-лимфоцитов после индивидуально подобранной ХТ (0,49±0,1 x109/л; р≤0,05). В обеих группах после лечения отмечены некоторые измене- ния качественного и количественного состава клеток адаптивно- го иммунитета: незначительное снижение числа В-лимфоцитов, общего числа Т-клеток и Т-цитотоксических лимфоцитов, в группе Д наблюдалось статистически значимое уменьшение относительного содержания Т-хелперов и как следствие пони- жение соотношения CD4+/CD8+ (табл.). Обсуждение Состояние основных звеньев иммунной системы полно- ценность качественного и количественного состава лимфо- цитов периферической крови их функциональная активность являются критически важными в контроле роста опухолей и в значительной степени влияют на прогноз лечения. Изменения в клеточном иммунном статусе имеют место при различных формах онкопатологии включая новообразования органа зрения. По данным литературы опухолевая прогрессия свя- зана с выраженными сдвигами в составе клеток как врожден- ного так и адаптивного звеньев иммунитета [32–39]. Так, при увеальной меланоме показаны нарушения в субпопуля- ционном составе лимфоцитов связанные с эффекторными клетками иммунной системы NK- и Т- цитотоксическими лимфоцитами [32]. По мнению целого ряда авторов сдвиги в соотношениях между пулами эффекторных лимфоцитов способны обладать клинической информативностью и могут быть прогностически значимыми при лечении опухолевых заболеваний [40–42]. В настоящее время большинство работ в данном направ- лении выполнены у взрослых в литературе отсутствует информация касательно клеточного иммунного статуса при офтальмоонкологии у детей в частности при ретинобластоме – наиболее распространенном типе глазной опухоли отли- чающийся высокой степенью злокачественности. Важность исследования субпопуляционного состава лимфоцитов крови обусловлена с тем что современные методы лечения данного заболевания включающие разные схемы ХТ крио- лучевую терапию и хирургическое вмешательство связаны с целым рядом побочных эффектов негативно отражающихся на состо- янии иммунной резистентности организма. Оценка иммунно- го статуса приобретает особую актуальность также в связи с активно ведущейся разработкой и обсуждением возможно- сти применения иммунотерапевтических средств при ретиноб- ластоме. Раннее было проведено исследование субпопуляцион- ного состава лимфоцитов у детей в зависимости от стадии заболевания и в ходе индивидуального анализа. Показано, что у трети пациентов при тяжелых стадиях нелеченой рети- нобластомы наблюдается изменение числа циркулирующих NK-лимфоцитов – важнейших компонентов врожденной иммун- ной защиты осуществляющих противоопухолевый надзор и в большинстве случаев отмечались разнообразные сдвиги в Т-клеточном звене иммунитета [27]. В данной работе впервые изучена динамика клеточного иммунного статуса у детей с запущенными формами ретино- бластомы (группы Д Е) на фоне органосохраняющего и ликви- дационного лечения. Важно что основные изменения в составе клеток обнаруженные в нашем исследовании также касались Т-лимфоцитов (в частности Т-хелперов) натуральных киллеров (табл.). Определено что до начала лечения числа натуральных киллеров в крови пациентов групп Д и Е были сопоставимы и достоверно превышали таковые у здоровых детей. Интересно, что значения циркулирующих NK-клеток согласно сообще- ниям P.C. Alves и соавт. Табакова и соавт. могут находиться в пределах нормы и даже несколько превышать ее верхнюю границу при неоплазиях яичников [40 43]. Однако эти данные, свидетельствующие в пользу результатов нашего исследования, получены при оценке клеточного иммунного статуса взрослых пациентов. Согласно нашим результатам можно предположить что уси- ление выработки клеток врожденного иммунитета (NK-клеток) является главной особенностью реакции детского организ- ма на внутриглазную опухоль поскольку ликвидационное лечение сопровождалось снижением абсолютного и отно- сительного числа натуральных киллеров в крови до нормы (табл.) Заключение Таким образом в ходе общего анализа результатов исследо- вания субпопуляционного состава лимфоцитов периферической крови у детей с ретинобластомой находящихся на органо- сохранном и ликвидационном лечении установлено что оба вида проводимого лечения обладают выраженным эффектом в отношении NK-клеток значимо понижая их абсолютное и относительное число в периферической крови. Оценка дина- мики основных параметров иммунного статуса не выявила выраженного неблагоприятного действия ХТ на клеточный состав адаптивного звена иммунитета. Требуются дальнейшее изучение особенностей субпопуляционного состава лимфоци- тов их изменений в частности натуральных киллерных клеток, в зависимости от тяжести ретинобластомы и применяемого лечения на больших по численности клинических выборках с целью определения параметров для прогноза заболевания, иммунологического мониторинга у детей получающих длитель- ные курсы ХТ для своевременной коррекции лечебной тактики.