Мороз С.Е., Лаврентьева Э.А., Хлысталов М.В., Ибадуллаева С.С., Попадюк В.И., Кастыро И.В., Ганьшин И.Б., Королев А.Г., Котов В.Н., Иванова Ю.В., Уварцева И.Д., Кули- кова И.А. Патоморфологические изменения в тканях при различных методах трансплантации жировой ткани (экспериментальное исследование). Head and neck. Голова и шея. Российский журнал. 2024;12(4):41–49
Цель исследования: оценить патоморфологические изменения окружающих тканей при трансплантации жировой ткани после различных техник ее механической обработки. Материал и методы. Животные были разделены на 4 группы, по 6 особей в каждой группе: 1-я груп- па – интактные животные (без воздействия); 2-я группа – контрольная (физиологический раствор); 3-я группа – имплантация цельного жирового графта субдермально. В 4-й группе измельченный при помощи скальпеля жир вводили под кожу с помощью шприца, однократно. Срезы окрашивали по методу Маллори, гематоксилином и эозином, метиленовым синим. Результаты. В эпидермисе наблюдалось увеличение толщины слоев клеточного эпидермиса за счет увеличения рядов клеток зернистого слоя. В образцах кожи опытных животных отмечалось увеличение рядов клеток шиповатого слоя и фигур митоза (метафазных пластинок). Толщина дермы увеличивалась за счет сетчатого слоя. В коже животных опытных групп возросла доля сосудов микроциркуляторного русла по сравнению с контрольными группами. Толщина жирового аутотрансплантата была заметно больше в 3-й группе, где имплантировали крупный жировой фрагмент, однако в этой группе почти у всех крыс наблюдались патологические реакции в виде лейкоцитарных, преимущественно лимфоцитарных инфильтраций, и некрозов различной степени выраженности. У животных 4-й группы наблюдались ин- фильтрации, содержащие лимфоциты и фибробластоподобные клетки, но были менее выраженными, чем в 3-й. В 4-й группе только у двух животных были выявлены сравнительно крупные жировые фрагмен- ты округлой формы с умеренной лимфоцитарной инфильтрацией и ограниченным очаговым некрозом ткани. Заключение. Пересаженный аутологичный измельченный жир у крыс через месяц после операции в эксперименте показал лучший эффект приживаемости по сравнению с трансплантацией цельного куска жира. Ключевые слова: липофиллинг, трансплантация жировой ткани, цельный жировой графт, измельченный жир Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов. Финансирование. Работа выполнена без спонсорской поддержки.
Purpose of the study. To evaluate the pathomorphological changes in surrounding tissues during adipose tissue transplantation after various techniques of its mechanical processing. Material and methods. Animals were divided into 4 groups, 6 animals in each group. Group 1 – intact animals (without exposure); Group 2 – control (saline solution); Group 3 consisted of animals that were implanted subdermally, through an incision with a diameter of 1 mm, a fragment of fat, previously extracted from a skin incision in the groin area. In group 4, fat crushed using a scalpel was injected under the skin using a syringe, once. Sections were stained using the Mallory method, hematoxylin and eosin, and methylene blue. Results. In the epidermis, an increase in the thickness of the cellular epidermal layers was observed, mainly due to an increase in the rows of cells of the granular layer. During the study, an increase in the rows of cells of the spinous layer and mitotic figures (metaphase plates) was also noted in skin samples of experimental animals. The thickness of the dermis increased mainly due to the reticular layer. In the skin of animals in the experimental groups, the proportion of microvasculature vessels increased compared to the control groups, which is physiologically significant. The thickness of the fat autograft was noticeably greater in the third group, where a large fat fragment was implanted, however, in this group, almost all rats observed pathological reactions in the form of leukocyte, predominantly lymphocytic, infiltration and necrosis of varying severity. In animals of the fourth group, infiltration containing lymphocytes and fibroblast-like cells was also observed but were less pronounced than in the third. In group 4, where fat, minced with a scalpel, was implanted once, relatively large round-shaped fat fragments were detected in only two animals. These fragments were accompanied by moderate lymphocytic infiltration and limited focal tissue necrosis. Conclusion. Transplanted autologous minced fat into rats one month after surgery in the experiment showed a better survival effect compared to transplantation of a whole piece of fat. Keywords: lipofilling, adipose tissue transplantation, whole fat graft, crushed fat Conflicts of interest. The authors have no conflicts of interest to declare. Funding. There was no funding for this study
Введение Липофиллинг различных отделов тела приобретает все боль- шее распространение и применяется как метод выбора или важная часть эстетических и реконструктивных хирургических вмешательств [1, 2]. Липофиллинг способствует улучшению косметических результатов после реконструктивно-пластиче- ских операций за счет нормализации объемного соотношения тканей [3]. Липофиллинг в зоне лица используется для устране- ния выраженных носогубных складок, слезных борозд, коррек- ции формы подбородка и скуловых областей, моделирования контура и размера губ [4]. По данным литературы, жировая ткань является идеальным филлером [5, 6]. Однако существуют различные техники обра- ботки жировой ткани перед ее имплантацией пациенту. Это в свою очередь может повлиять на развитие осложнений, прижи- ваемость, клинический и эстетический эффекты в различные периоды после вмешательства [7–11]. Отсутствие четкого понимания гистологических процессов в отдаленном периоде после липофилинга обусловливает акту- альность настоящего исследования. Цель исследования: оценить патоморфологические измене- ния окружающих тканей при трансплантации жировой ткани после различных техник ее механической обработки. Материал и методы Сравнительное гистологическое исследование проводили на самцах аутобредных крыс линии Wistar возрастом 3–4 месяца массой 195±25 г. Животные были разделены на 4 группы, по 6 особей в каждой группе. Первая группа – интактные живот- ные (без воздействия, контроль-негативная группа); 2-я груп- па – контрольная (физиологический раствор объемом 1 мл в межлопаточной области, контроль-позитивная группа); 3-ю группу составляли животные, которым имплантировали субдер- мально, через разрез диаметром 4 мм, фрагмент жира 4х4х4 мм, предварительно извлеченный из разреза кожи в паховой области (рис. 1 а, б). В 4-й группе измельченный при помощи скальпеля жир (4х4х4 мм) вводили под кожу межлопаточной области с помощью шприца, однократно. Материал вводили в межлопаточную область спины, слегка приподнимая кожу для субдермального введения на участке 1 см2 (рис 1 в). Через 1 месяц проводили эвтаназию животных при помощи токсичных доз раствора Золетил 100. Для гистологического исследования забирали лоскут кожи площадью 4 см2, фикси- ровали его в 10% нейтральном формалине. Фиксацию, при- готовление и окрашивание препаратов проводили согласно стандартным гистотехническим протоколам. Срезы окрашивали по методу Маллори, гематоксилином и эозином, метиленовым синим. В исследовании использовали световой микроскоп Axiostar (Carl Zeiss). При гистологическом исследовании учиты- вали характеристики эпидермиса, дермы и подкожной жировой основы, оценивали удельную долю сосудов микроциркулятор- ного русла. От каждого животного из группы исследовали по одному срезу. Исследования на животных проводились согласно требова- ниям Приказа Министерства высшего и среднего специального образования СССР №742 от 13.11.1984 «Правила проведения работ с использованием экспериментальных животных». Результаты Результаты гистологической оценки кожи и окружающих тка- ней в межлопаточной области контроль-негативной (1-я группа) и контроль-позитивной (2-я группа) групп не различались между собой и не имели патологических изменений. Группа 3, имплантация жирового графта. Толщина эпидерми- са в образцах данной группы варьировалась от 17,5 до 18,6 мкм. Кератиноциты базального слоя имели кубическую форму, ядра клеток гиперхромные. Фигуры митоза (метафазные пластинки) в среднем, встречались 2–4 на 3 исследуемых поля зрения (х400). Кератиноциты шиповатого слоя формировали 3–4 ряда клеток. Зернистый слой был представлен 2–3 рядами кератиноцитов. Толщина зернистого слоя варьировалась от 5,9 до 6,9 мкм. В одном поле зрения (х100), отмечалось до 5–6 волосяных фолликулов. Дермоэпидермальное соединение четкое, дер- мальные сосочки выраженные. В дерме изменения были более заметными, толщина дермы в 3-й группе варьировалась от 470 до 560 мкм. Имплантированный жир располагался между сетчатым слоем дермы и подкожной мышцей. В сетчатом слое дермы, в области имплантации у одного животного обнаружи- вался обширный лимфоцитарный инфильтрат, окружающий остатки некротизированного участка ткани (рис. 2а). Граница инфильтрата представлена соединительной тканью, отграничивающей окружающую жировую ткань с каплями жира разного размера. Лимфоцитарный инфильтрат представлял собой вал из лимфоцитов с тонкими прослойками волокнистой соединитель- ной ткани (рис. 2б). У двух крыс этой группы изменения были подобные, но менее выраженные. На границе с жировой тканью были видны ограниченные участки инфильтрации с остатками грануляционной ткани, зонами некроза, расположенных рав- номерно вокруг фрагментов графта. Последние представляли собой округлые крупные образования (рис. 2 в, г). У остальных крыс данной группы жир был распределен более равномерно в виде сравнительно небольших округлых фрагментов с незначи- тельной лимфоцитарной инфильтрацией (рис. 2д). Округлые фрагменты имплантированного жира напоминали адипоциты, однако были большего размера. Для сравнения отметим, что диаметр адипоцитов жировой ткани около 55–70 мкм, тогда, как диаметр микроскопических фрагментов имплан- тированного жира варьировался от 60 до 500 мкм, некоторые фрагменты были больше жировой клетки в 10 и более раз. Число профилей сальных желез в поле зрения было от 5 до 6. Площадь сальных желез варьировалась от 4324,6 до 5450, 6 мкм2. Сосуды сетчатого слоя дермы, прилежащего к зоне имплантации жира, были полнокровны, но без признаков диа- педезных кровоизлияний. Волокна дермы расположены были плотно друг к другу, равномерно окрашены. Толщина жирового имплантата, распределенного между дермой и подкожной мыш- цей, была от 300 до 900 мкм. Доля сосудов микроциркулятор- ного русла в сетчатом слое дермы составляла 8,05±0,99%. На рис. 2е видны остатки некротизированной ткани в окружении лимфоцитов. Группа 4, имплантация механически измельченной с помощью скальпеля жировой ткани. Толщина эпидермиса в образцах данной группы была до 18,0 мкм. Кератиноциты шиповатого слоя составляли до 4 рядов клеток полигональной формы. Зернистый слой был представлен 2–3 рядами кератиноцитов с хорошо выраженными кератогиалиновыми гранулами в цито- плазме. Толщина зернистого слоя варьировалась от 6,0 до 7,5 мкм. В одном поле зрения, отмечалось до 4–6 волосяных фолликулов. Толщина дермы в 4-й группе варьировалась от 620 до 680 мкм. Имплантируемый жир располагался чаще между сетчатым слоем дермы и подкожной мышцей, но не сплош- ным слоем, а диффузно. У двух животных 4-й группы были обнаружены достаточно крупные фрагменты жира округлой пы были обнаружены участки жировой ткани, образован- или неправильной формы (рис. 3 а). Различные по размеру ной большим количеством жировых клеток. (рис. 3 г, д). жировые фрагменты были разделены тонкими прослойка- Обращала на себя внимание сравнительно большая доля В Г ми соединительной ткани, в составе которой преобладали площади, занятой сосудами микроциркуляторного русла. лимфоциты (рис. 3 б, в) и вытянутые, отростчатые, фибро- Доля сосудов микроциркуляторного русла в сетчатом слое бластоподобные клетки. В срезах кожи 4 животных 4-й группы. согласно критерию Манн–Уитни, чем в 3-й группе (p