Инновационная система подбора антибиотика для микробного профиля у пациентов с хроническим полипозным риносинуситом

Острые бактериальные риносинуситы, а также обострения хронических остаются основной проблемой современного здравоохранения. Прием антибактериальных препаратов является основным методом лечения при установлении соответствующего диагноза. Для подбора оптимальной антибактериальной терапии ключевым элементом является правильная верификация возбудителя. Хронический риносинусит (CRS), осложненный бактериальной инфекцией, демонстрирует недостаточную эффективность существующих методов тестирования антимикробной чувствительности (AST) при выборе оптимальной антибиотикотера- пии. Для этих целей была разработана тест-система выбора антибиотика AtbFinder, призванная устранить недостатки традиционных методов тестирования.
Целью исследования послужил сравнительный анализ микробного состава носовой слизи у пациентов с риносинуситом, который был проанализирован стандартным методом и новой тест-системой.
Материал и методы. В исследовании приняли участие 25 пациентов с установленным диагнозом CRS. На кафедре оториноларингологии с клиникой проводился забор тампонов, которые в стерильном виде были установлены сроком на 30 минут в область среднего носового хода, после чего хранились при температуре около 4 °C без замораживания и были доставлены в лабораторию кафедры микробиологии в течение 30 минут после забора. Данные образцы анализировали с применением как стандартных лабораторных методов, так и системы AtbFinder для сравнительной оценки их эффективности.
Результаты показали 18 случаев расхождения между результатами, полученными с использованием системы AtbFinder на среде TGV и стандартного метода AST. Анализ этих расхождений показал, что в 18 случаях антибиотики, признанные эффективными по данным стандартного AST, были классифицированы как неэффективные в системе AtbFinder. Это свидетельствует о том, что несмотря на заявленную чувстви- тельность в условиях монокультур, бактерии продолжали расти в лунках с антибиотиками в системе AtbFinder. В частности, снижение чувствительности было зарегистрировано для таких антибиотиков, как амоксицил- лин-клавулановая кислота, амоксициллин, цефуроксим, цефалексин, азитромицин и кларитромицин. В то время как стандартный метод микроразведений демонстрировал эффективное подавление роста бактерий этими препаратами, система AtbFinder выявила их неэффективность в условиях полимикробных сообществ.
Заключение. Результаты данного исследования подчеркивают ключевые ограничения традиционных методов тестирования AST в контексте CRS, особенно при работе с полимикробными инфекциями. Инновационная система AtbFinder, использующая среду TGV для моделирования сложных микробных сообществ, продемонстрировала значительные преимущества по сравнению с традиционными подходами. Клиническая значимость системы заключается в ее способности моделировать условия, максимально приближенные к реальной инфекционной среде.
Ключевые слова: синусит, микробиота, бактерия, биопленки, питательная среда, антибиотики, инфекция, антимикробная чувствительность
Конфликт интересов. Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование. Исследование выполнено за счет гранта Российского научного фонда от №24-75-10028 от 31.07.2024 https://rscf.ru/project/24-75-10028

Acute bacterial rhinosinusitis, as well as exacerbations of chronic rhinosinusitis, remain a major public health problem today. Antibacterial drugs represent the mainstay of treatment given the appropriate diagnosis. Proper identification of the causative agent is crucial for the selection of optimal antibiotic therapy.
The existing antimicrobial susceptibility testing (AST) methods are insufficient for the selection of optimal antibiotic therapy in chronic rhinosinusitis (CRS) complicated by bacterial infection. For this purpose, the AtbFinder antibiotic selection test system was developed to address the drawbacks of traditional testing methods.
The aim of the study was a comparative analysis of the microbial composition of nasal mucus in patients with rhinosinusitis, as assessed by the standard method and the new test system.
Material and methods. Twenty-five patients with established diagnosis of CRS participated in the study. At the Department of Otorhinolaryngology with Clinic, swabs were collected from the middle nasal passage and placed in a sterile container for 30 minutes, then stored at approximately 4°C without freezing and transported to the laboratory of the Department of Microbiology within 30 minutes after collection. These samples were analyzed using both standard laboratory methods and the AtbFinder system for comparative performance evaluation. Results showed 18 cases of discrepancies between the results obtained using the AtbFinder system on TGV medium and the standard AST method. Analysis of these discrepancies showed that the antibiotics found to be effective by standard AST were classified as ineffective by the AtbFinder system in 18 cases. This indicates that despite the reported sensitivity under monoculture conditions, bacteria continued to grow in wells with antibiotics in the AtbFinder system. Decreased sensitivity was reported for antibiotics such as amoxicillin-clavulanic acid, amoxicillin, cefuroxime, cephalexin, azithromycin, and clarithromycin. While the standard microdilution method demonstrated effective suppression of bacterial growth with these drugs, the AtbFinder system revealed their ineffectiveness in polymicrobial communities.
Conclusion. The results of this study highlight key limitations of traditional AST testing methods in the context of CRS, especially when working with polymicrobial infections. The innovative AtbFinder system, which uses the TGV environment to model complex microbial communities, has demonstrated significant advantages over traditional approaches. The clinical relevance of the system lies in its ability to simulate conditions as close as possible to the real infectious environment.
Keywords: sinusitis, microbiota, bacterium, biofilms, nutrient media, antibiotics, infection, antimicrobial susceptibility
Conflicts of interest. The authors have no conflicts of interest to declare.
Financing. The study was funded by the grant of the Russian Science Foundation No. 24-75-10028 dated July 31, 2024. https://rscf.ru/project/24-75-10028

Введение Риносинуситы представляют собой воспалительные заболе- вания, в основе которых часто лежит инфекционный процесс. Острый риносинусит преимущественно вызывается вирусными инфекциями, возникающими на фоне респираторных вирусных заболеваний [1–3]. В большинстве случаев вирусный риносину- сит разрешается самостоятельно, однако возможно присоедине- ние вторичной бактериальной инфекции, что приводит к более выраженным и затяжным симптомам, требующим антибактери- альной терапии [4]. В отличие от острого течения хронический риносинусит (CRS) характеризуется длительной бактериальной колонизацией, образованием биопленок и нарушением мест- ного иммунитета, что способствует развитию устойчивости к антибиотикам и хронизации воспалительного процесса [5–9]. CRS – это клинический синдром, который характеризуется длительным воспалением слизистой оболочки носа и околоно- совых пазух и обычно делится на 2 подтипа в зависимости от наличия или отсутствия носовых полипов. Этиология и патогенез обеих форм остаются областями активных исследований. За последние 15 лет был предложен ряд гипотез для объяснения всего или части клинического спектра CRS. Эти гипотезы отра- жают концепцию о том, что CRS является результатом дисфунк- ционального взаимодействия индивидуальных характеристик хозяина и факторов, экзогенных для хозяина. Обсуждаются 6 теорий этиологии и патогенеза CRS: 1) «грибковая гипотеза», 2) «суперантигенная гипотеза», 3) «биопленочная гипотеза» и 4) «микробиомная гипотеза», которые подчеркивают ключевые факторы окружающей среды, и 5) «эйкозаноидная гипотеза», и 6) «гипотеза иммунного барьера», которые описывают спе- цифические факторы хозяина. Исторически CRS без полипов (CRSsNP) считался результатом не полностью вылеченной или неразрешенной бактериальной инфекции, в то время как CRS с полипами (CRSwNP) считался неинфекционным заболеванием, связанным с атопией. Тем не менее выявлено активное влияние микробного агента на течение CRS как с полипами, так и без. Наиболее значимыми факторами окружающей среды при CRS являются как грибки, так и бактерии [10]. Антибактериальная терапия остается важным компонентом лечения пациентов с риносинуситами, особенно при подтвер- жденной бактериальной инфекции [11–13]. Выбор антибиоти- ков, продолжительность их действия и необходимость комбини- рованного подхода зависят от клинических проявлений, частоты рецидивов и наличия факторов риска, таких как коморбидные состояния и резистентность возбудителей. Современные стра- тегии лечения направлены не только на эрадикацию инфекции, но и на минимизацию побочных эффектов и предотвращение развития антибиотикорезистентности [14, 15]. Комбинированная антибиотикотерапия при риносинуси- тах применяется при тяжелом или рецидивирующем течении заболевания, полимикробной инфекции и наличии факторов антибиотикорезистентности, что делает данный подход важной стратегией в современной терапии [16]. Неадекватная антибак- териальная терапия способствует повышению устойчивости к антибиотикам. В современной клинической практике фенотипические и генотипические методы тестирования антимикробной чувстви- тельности AST (Antimicrobial susceptibility testing) играют клю- чевую роль в выборе антибиотикотерапии. Однако они имеют ряд ограничений, снижающих их эффективность, особенно при лечении инфекций, таких как риносинуситы. Одним из основных недостатков этих методов является их сосредоточенность на одном доминирующем патогене, выделенном из биологического образца. Такой подход основан на устаревшем представлении о том, что инфекцию вызывает только один микроорганизм, тогда как современные исследования свидетельствуют о полимикроб- ной природе многих бактериальных инфекций дыхательных путей, мочевыводящей системы, кожи и мягких тканей [17–23]. Традиционные методы AST проводят в лабораторных усло- виях на чистых культурах бактерий, что не отражает сложной экосистемы, существующей в очаге инфекции. В реальных условиях такие факторы, как биопленки, межбактериальные взаимодействия и микробные кооперативные механизмы, могут существенно изменять восприимчивость микроорганизмов к антибиотикам [24–30]. Существующие методы также не учи- тывают коллективную устойчивость бактерий в полимикробных сообществах, где одни микроорганизмы могут защищать другие за счет механизмов резистентности, таких как эффлюксные насосы [31, 32]. Кроме того, игнорируется роль «бактериаль- ных помощников» – микроорганизмов, которые не являют- ся основными патогенами, но способствуют их выживанию и поддерживают инфекционный процесс [33–35]. В результате чувствительность, определенная в лаборатории, не всегда соот- ветствует эффективности антибиотика in vivo. Еще одной проблемой является длительность проведения стандартных AST, которая может составлять несколько дней. Это вынуждает врачей назначать эмпирическую терапию широ- кого спектра, что повышает риск нецелевого воздействия на микробиоту, формирования резистентных штаммов и неэф- фективности лечения [36–38]. CRS, осложненный бактериальной инфекцией, демонстрирует недостаточную эффективность существующих методов AST при выборе оптимальной антибиотикотерапии. Исследования подтверждают, что Moraxella catarrhalis, Haemophilus influenzae и Streptococcus pneumoniae являются одними из наиболее частых бактериальных возбудителей как острого, так и CRS [39, 40]. Устойчивость Staphylococcus aureus у пациентов с CRS также демонстрирует ограниченную эффективность традиционных методов AST при подборе антибиотикотерапии. Устойчивость S. aureus в таких случаях обусловлена особенностями его пове- дения в полимикробных сообществах, которые не учитываются стандартными методами AST. Исследования показывают, что S. aureus часто обнаруживается в ассоциации с анаэробами, такими как Prevotella и Fusobacterium, при CRS [1]. Эти анаэро- бы, присутствующие в верхних дыхательных путях, обладают способностью разлагать муцины, высвобождая метаболиты, которые S. aureus использует в качестве источника питания. Этот процесс создает метаболически благоприятную среду, способствующую длительному выживанию и персистенции S. aureus в полости носа и околоносовых пазух [41]. Кроме того, Prevotella и Fusobacterium играют ключевую роль в поддержании условий, благоприятных для S. aureus. Эти микроорганизмы продуцируют короткоцепочечные жирные кислоты и другие метаболиты, которые снижают pH среды и окислительно-восста- новительный потенциал, создавая неблагоприятные условия для роста конкурирующих аэробных бактерий [42]. Однако S. aureus, обладая высокой адаптивностью, способен выживать в кислой среде, что обеспечивает его устойчивость и пролонгированную персистенцию в сложных полимикробных сообществах. Ранее была представлена инновационная тест-система выбора антибиотика AtbFinder, разработанная для устранения недостат- ков традиционных методов AST, включая проблемы, связанные с устойчивостью к комбинированной антибиотикотерапии [43]. Этот метод основан на фенотипическом анализе и предлагает альтернативу стандартным подходам AST, которые обычно ограничиваются тестированием отдельных патогенов в условиях чистых культур. AtbFinder применяет новый подход к подбору антибиотиков, оценивая их эффективность в полимикробных биопленках, созданных из биологических образцов пациентов. Система использует уникальную TGV-среду, которая способст- вует развитию более разнообразного микробного сообщества в виде смешанных биопленок в отличие от стандартных культу- ральных сред. Планшетка AtbFinder состоит из нескольких лунок, куда добавляются антибиотики, что позволяет анализировать их влияние на взаимодействие бактерий в условиях, максимально приближенных к реальной инфекционной среде. Одним из ключевых преимуществ AtbFinder является возмож- ность подбора антибиотиков с учетом их локальной концентра- ции в тканях. Это существенно отличает его от традиционных методов AST, которые основываются на минимальной инги- бирующей концентрации (MIC) и порогах чувствительности, ориентированных на концентрации антибиотиков в крови, а не в очагах инфекции. Такой подход делает тестирование более клинически значимым и позволяет учитывать особенности тече- ния инфекционного процесса. Эффективность антибиотиков в системе AtbFinder определяется их способностью оказывать бактерицидное действие или полностью подавлять рост всех микроорганизмов в образце. Практическое применение этого метода уже доказало свою ценность. Например, у пациента с рецидивирующей инфекцией мочевыводящих путей, развившей- ся после операции по удалению почечной опухоли, стандартные методы AST не дали результата. Однако после использования AtbFinder инфекция была успешно устранена [44]. Аналогично, применение AtbFinder для подбора антибиотиков у пациентов с муковисцидозом привело к значительному улучшению кли- нических и микробиологических показателей по сравнению с антибиотиками, назначенными на основе стандартных AST [45]. Материал и методы В исследовании приняли участие 25 человек. Биологические образцы были собраны в клинике оториноларингологии ПСПбГМУ им. И.П. Павлова (Санкт-Петербург), после чего хра- нились при температуре около 4 °C без замораживания и были доставлены в лабораторию кафедры микробиологии того же университета в течение 30 минут после забора. В исследовании использовали назальные мазки, полученные методом тампона- ды, у пациентов с CRS [46, 47]. Ватный тампон помещали в сте- рильную пробирку со стерильным физиологическим раствором объемом 10 мл. Данные образцы анализировали с применением как стандартных лабораторных методов, так и системы AtbFinder, для сравнительной оценки их эффективности. Антибиотики. AST было ограничено препаратами, использу- емыми для системного лечения CRS, которые были выбраны в соответствии с рекомендациями Американской академии оториноларингологии и челюстно-лицевой хирургии (AAO-HNS) [48]. Антибиотики добавляли в TGV-среду в концентрациях, соответствующих максимально достижимым уровням в очаге инфекции (слизистая оболочка носа), согласно данным лите- ратуры: амоксициллин-клавулановая кислота (2 мкг/мл для амоксициллина и 0,8 мкг/мл для клавулановой кислоты) [49], амоксициллин 2 мкг/мл [50], цефуроксим 3 мкг/мл [51], цефа- лексин 3 мкг/мл [52], азитромицин 2 мкг/мл [53], кларитромицин 8мкг/мл, доксициклин 2 мкг/мл [54], левофлоксацин 6 мкг/мл, моксифлоксацин 5 мкг/мл, а также их комбинации. Настоящее исследование было одобрено локальным эти- ческим комитетом (№24-75-10028 протокола заседания ЛЭК) Для сбора биологического материала использовали ватные тампоны, которые переносили в стерильный физиологический раствор объемом 10 мл. Экстракция биоматериала проводи- лась с использованием вортексирования в течение 30 секунд. После гомогенизации 25 мкл суспензии наносили на TGV-агар в каждую лунку планшета и инкубировали при 37 °C в аэроб- ных и микроаэрофильных (5% O2) условиях в течение 8 и 24 часов, в анаэробных условиях – в течение 24 и 48 часов. Для контрольной группы 100 мкл суспензии высевали на чашки Петри диаметром 90 мм, содержащие следующие питательные среды: LB-агар, шоколадный агар, кровяной агар Columbia Agar Base с добавлением 5% человеческих эритроцитов и среду Кита–Тароцци (все ThermoFisher, USA). Контрольные образцы инкубировали при 37 °C в течение 24–72 часов в аэробных, микроаэрофильных и анаэробных условиях согласно лабора- торным рекомендациям [55]. Идентификацию бактерий до уровня вида из биологических образцов проводили с использованием последовательных посе- вов на среды AtbFinder или LB. Для проверки чистоты полученных изолятов использовали световую микроскопию с использова- нием микроскопа Leica 2500DM (Leica Microsystems, Ветцлар, Германия). Для исключения контаминации смешанными бакте- риальными культурами каждый изолят исследовали не менее чем на 10 полях зрения. После получения монокультуры проводили идентификацию микроорганизмов с использованием масс-спек- трометрии MALDI-TOF (Microflex LT, Bruker Daltonics, Бремен, Германия). Анализ выполняли в соответствии с протоколом про- изводителя после 24 часов инкубации при оптимальных условиях. Система AtbFinder представляет собой 24-луночный планшет (BIOFIL), содержащий питательную среду TGV, состоящую из панкреатического гидролизата казеина, пептического гидролиза- та мяса, сердечного панкреатического гидролизата, дрожжевого экстракта, крахмала и воды (Human Microbiology Institute, Нью- Йорк, США). Клинические образцы наносили непосредственно на поверхность TGV-агара в каждую лунку планшета в объеме 25 мкл, избегая повреждения среды. Из 24 лунок планшета 22 содержали антибиотики в виде отдельных препаратов и их комбинаций в концентрациях, соответствующих уровням, дости- жимым в очаге инфекции. Две лунки использовали в качестве контрольных, и они содержали TGV-агар без антибиотиков. После нанесения образцов планшеты инкубировали при темпе- ратуре 37 °C в различных кислородных условиях. Микробный рост в лунках оценивали визуально, а также с применением стереомикроскопа Leica S6 (Leica Microsystems, Германия). Критериями наличия роста служили гемолиз, образование пленки и формирование микроколоний, которые сравнивали между контрольными лунками и лунками с антибиотиками. Рост микроорганизмов в лунке с антибиотиком свидетельство- вал об их устойчивости к данному препарату, вследствие чего антибиотик классифицировали как «неэффективный». Если в присутствии антибиотика бактериальный рост отсутствовал, препарат считался «эффективным», т.к. полностью подавлял или уничтожал микроорганизмы в образце. В редких случаях, если через 8 часов не наблюдалось роста даже в контрольных лунках, такие культуры исключали из дальнейшего анализа. Для оценки чувствительности микроорганизмов к антимикроб- ным препаратам был использован стандартный in vitro культуральный метод. Определение MIC проводилось с применением метода микроразведений в бульоне, следуя рекомендациям CLSI (Clinical and Laboratory Standards Institute). Классификацию изоля- тов осуществляли в соответствии с установленными пороговыми значениями CLSI, при этом изоляты, отнесенные к категории «промежуточных», классифицировали как «устойчивые». Для про- ведения тестирования применяли бактериальный инокулят в кон- центрации 5×105 КОЕ/мл. Антимикробные препараты подвергали серийному двукратному разведению в катион-корректированном бульоне Мюллера–Хинтона и Brucella-бульоне, обеспечивающем оптимальные условия для роста микроорганизмов и точность определения MIC. MIC определяли как наименьшую концентрацию антибиотика, полностью подавляющая видимый рост бактерий. Каждое тестирование выполняли в трехкратной повторности, что обеспечивало достоверность полученных данных. Результаты Мы провели сравнительный анализ питательной среды TGV и стандартной среды для культивирования микроорганизмов, выделенных из образцов пациентов с CRS. Основными параме- трами оценки были скорость роста бактерий, частота полими- кробных ассоциаций и выявление редких микроорганизмов в аэробных и анаэробных условиях Через 8 часов культивирования в аэробных условиях на среде TGV рост бактерий наблюдался во всех 25 (100%) из 25 образцов. Полимикробные сообщества (2 и более микроорга- низма) присутствовали в 20 (80%) из 25 образцов, включая S. pneumoniae, Streptococcus pyogenes, H. influenzae, M. catarrhalis, S. aureus, Klebsiella pneumoniae и Klebsiella oxytoca в различных комбинациях. Через 24 часа полимикробные ассоциации были зарегистрированы уже во всех образцах (100%). На стандартной среде через 24 часа бактериальный рост также наблюдался во всех 25 (100%) образцах, однако полимикробные сообщества были выявлены только в 13 (52%) из 25 образцов, что значительно ниже по сравнению с TGV. Наиболее часто встречае- мыми аэробными патогенами на TGV были S. pneumoniae (100%), H. influenzae (84%), S. aureus (80%), K. pneumoniae (76%), K. oxytoca (71%) и M. catarrhalis (68%). На стандартной среде частота выявления H. influenzae, S. aureus, K. pneumoniae и K. oxytoca была ниже – 64%, 56, 48 и 39% соответственно. S. pneumoniae был идентифицирован одинаково часто (100%), тогда как M. catarrhalis встречалась в 60% образцов, что реже, чем на TGV (72%) (табл. 1). Примечательно, что некоторые микроорганизмы, включая Neisseria spp., Bacillus spp., Acinetobacter spp., Rothia spp. и Corynebacterium spp., Propionibacterium spp., Micrococcus spp. были обнаружены только на среде TGV и не выявлялись при культивировании на стандартной среде. Через 24 часа культивирования в анаэробных условиях бак- териальный рост был обнаружен в 13 (52%) из 25 образцов, при этом в 9 (69%) из них наблюдались полимикробные ассоциации. Наиболее часто встречающиеся анаэробные микроорганизмы включали Prevotella spp., Fusobacterium spp., Bacteroides spp. и Peptostreptococcus spp. Продление инкубации до 48 часов позволило выявить анаэробный рост еще в 3 образцах, увеличив общее число положительных находок до 16 (64%) из 25, при этом полимикробные ассоциации были обнаружены в 13 (81%) из 16 положительных образцов. На стандартной среде через 48 часов рост анаэробов наблю- дался лишь в 5 (20%) из 25 образцов, причем полимикробные ассоциации не были выявлены вовсе. Изолированными микроорганизмами стали Bacteroides fragilis (2 образца), Prevotella spp., Veillonella spp. и Peptostreptococcus spp. (по 1 образцу). В отличие от стандартной среды, TGV позволила выявить более широкий спектр анаэробных микроорганизмов, вклю- чая Clostridium spp., Porphyromonas spp., Eikenella corrodens, Parvimonas micra и Actinomyces spp., которые не были иден- тифицированы при использовании стандартных методов. При этом в тех образцах, где не было роста анаэробов на TGV, роста также не наблюдалось и на стандартной среде. В ходе исследования была проведена сравнительная оценка чувствительности бактерий, выделенных из клинических образцов, к 9 антибиотикам и 13 их комбинациям с использованием среды TGV в системе AtbFinder и стандартного метода микро- разведений (AST). Для анализа были отобраны 5 случайных биообразцов. В результате было выявлено 18 случаев расхо- ждения между результатами, полученными с использованием системы AtbFinder на среде TGV и стандартного метода AST. Анализ этих расхождений показал, что в 18 случаях антибиотики, признанные эффективными по данным стандартного AST, были классифицированы как неэффективные в системе AtbFinder. Это свидетельствует о том, что несмотря на заявленную чув- ствительность в условиях монокультур, бактерии продолжали расти в лунках с антибиотиками в системе AtbFinder. В частности, снижение чувствительности было зарегистрировано для таких антибиотиков, как амоксициллин-клавулановая кислота (AMC), амоксициллин (AMX), цефуроксим (CFR), цефалексин (CLX), азитромицин (AZM) и кларитромицин (CLR). В то время как стандартный метод микроразведений демонстрировал эффек- тивное подавление роста бактерий этими препаратами, система AtbFinder выявила их неэффективность в условиях полими- кробных сообществ. Эти результаты указывают на потенциальные ложнополо- жительные результаты стандартного метода AST, при которых антибиотики, считающиеся эффективными in vitro, могут не ока- зывать достаточного воздействия in vivo в условиях смешанных бактериальных сообществ. Важно отметить, что стандартный метод AST, основанный на тестировании монокультур, не всегда способен адекватно моделировать реальную микробиологиче- скую картину при полимикробных инфекциях. В таких условиях взаимодействие между различными микроорганизмами, вклю- чая формирование биопленок и обмен генами резистентности, может существенно изменять антибиотикочувствительность, что не учитывается в традиционных подходах (табл. 2). Особое внимание в исследовании было уделено комбиниро- ванной антибиотикотерапии, которая продемонстрировала повы- шенную эффективность в условиях полимикробных инфекций. Например, комбинация AMC и CFR в системе AtbFinder показала улучшенную активность против смешанных бактериальных сообществ, включая как грамотрицательные, так и грамположи- тельные микроорганизмы. Аналогично, комбинации левофлок- сацина (LVX) и AZM оказались эффективными в подавлении роста патогенов, проявляющих устойчивость к монотерапии. Таким образом, система AtbFinder, учитывающая сложные взаимодействия в полимикробных сообществах, предоставляет более точные данные для выбора антибиотикотерапии, что особенно важно при лечении хронических инфекций, таких как CRS. Эти результаты подчеркивают необходимость пересмотра традиционных подходов к тестированию антибиотикочувстви- тельности и внедрения новых методов, способных учитывать реальные условия инфекционного процесса. Обсуждение Результаты данного исследования подчеркивают клю- чевые ограничения традиционных методов AST в контексте CRS, особенно при работе с полимикробными инфекциями. Инновационная система AtbFinder, использующая среду TGV для моделирования сложных микробных сообществ, проде- монстрировала значительные преимущества по сравнению с традиционными подходами. Одним из ключевых преимуществ системы AtbFinder явля- ется ее способность выявлять полимикробные ассоциации, которые часто остаются незамеченными при использовании стандартных методов культивирования. Наша работа показала, что среда TGV позволяет обнаружить более широкий спектр микроорганизмов, включая анаэробы и редкие виды, такие как Neisseria spp., Bacillus spp., Acinetobacter spp. и др. Это особенно важно для CRS, где полимикробные инфекции и образование биопленок играют значительную роль в хронизации воспали- тельного процесса. Традиционные методы, основанные на культивировании монокультур, не учитывают взаимодействие между микро- организмами, что может приводить к недооценке сложности инфекционного процесса. Например, ассоциации S. aureus с анаэробами, такими как Prevotella spp. и Fusobacterium spp., могут способствовать его устойчивости и персистенции, что не всегда выявляется стандартными методами AST. Важным результатом исследования стало выявление расхо- ждений между данными, полученными с помощью AtbFinder и стандартного метода микроразведений. В 18 случаях антибиоти- ки, которые считались эффективными по результатам стандарт- ного AST, не подавляли рост бактерий в системе AtbFinder. Это указывает на потенциальные ложноположительные результаты традиционных методов, которые не учитывают влияние поли- микробных взаимодействий на антибиотикочувствительность. Например, такие антибиотики, как AMC, AZM и CLR, показали сниженную эффективность в условиях полимикробных биопле- нок, несмотря на их активность в тестах на чистых культурах. Это подчеркивает важность учета сложных микробных сообществ при выборе антибиотикотерапии, особенно при хронических инфекциях, таких как CRS. Система AtbFinder также продемонстрировала свою эффек- тивность в подборе комбинированной антибиотикотерапии. Например, комбинация AMC и CFR показала улучшенную актив- ность против смешанных бактериальных сообществ, включая как грамположительные, так и грамотрицательные микроорга- низмы. Это подтверждает, что комбинированная терапия может быть более эффективной в условиях полимикробных инфекций, где монотерапия часто оказывается недостаточной. Клиническая значимость системы AtbFinder заключается в ее способности моделировать условия, максимально приближен- ные к реальной инфекционной среде. Учет локальной концен- трации антибиотиков в тканях, а также взаимодействия между микроорганизмами делает этот метод более релевантным для практического применения. Это особенно важно для пациентов с CRS, где стандартные подходы к лечению часто оказывают- ся недостаточно эффективными из-за сложности микробных сообществ и формирования биопленок. Несмотря на многообещающие результаты, исследование имеет некоторые ограничения. Во-первых, выборка пациентов была относительно небольшой, что требует дальнейших иссле- дований на более крупных группах. Во-вторых, система AtbFinder требует дополнительной валидации в различных клинических условиях, чтобы подтвердить ее универсальность и примени- мость для других типов инфекций. Заключение В целом, система AtbFinder представляет собой значительный шаг вперед в области антимикробного тестирования, особенно для сложных полимикробных инфекций, таких как CRS. Ее спо- собность учитывать взаимодействие микроорганизмов и моде- лировать реальные условия инфекции делает ее ценным инструментом для оптимизации антибиотикотерапии. Дальнейшие исследования и клиническое внедрение этого метода могут значительно улучшить результаты лечения пациентов с CRS и другими хроническими инфекциями